實驗技術原理:
細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
因為不同的細胞在生理代謝及分裂上均存在差異,因此研究者將外源遺傳物質導入細胞的過程中需要選擇不同的方式。目前,將外源物質導入細胞的方法主要分為三大類:
1、脂質體(或是脂質體替代物)轉染;
2、電轉;
3、病毒感染。
這三種方法互有優劣。脂質體或是脂質體替代物轉染操作簡便,價格低廉,但是對細胞毒性大。而且,有些細胞通過脂質體轉染效率很低;電轉操作方便快捷,但是需要專門的儀器,對細胞損傷也比較大;病毒感染克服了前兩者的劣勢,感染效率高,對細胞毒性小,但是病毒前期包裝需要大量的時間和精力。
實驗操作流程:
1、轉染試劑的準備
a. 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
b. 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。
2、選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體[1] 體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體 積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震蕩。
3、將混合液在室溫放置10-15分鐘。
4、吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。
5、加入混合液,將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6、到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。
客戶提供:
1、細胞株(可由我們代購)
2、轉染基因信息、載體、轉染細胞樣本、相關文獻和轉染基因。也可由我們設計并收費合成含轉染基因的質粒。
3、凍存細胞樣品,以干冰運輸;培養細胞樣品,密封培養瓶灌滿生長培養基運輸。
交付標準:
1、轉染細胞株
2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果)
其他: 細胞轉染時DNA量如果比較多,轉染時培養基中如果有抗生素,是否會導致細胞死亡。
收費標準/服務周期/提供結果:
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