流式細胞術實驗原理 

待測樣品(如細胞、染色體、精子或細菌等)經熒光染料染色后制成樣品懸液，在一定壓力下通過殼液包圍 的進樣管而進入流動室，排成單列的細胞，由流動室的噴嘴噴出而成為細胞液流，并與入射激光束相交。 細胞被激發而產生熒光，由放在與入射的激光束和細胞液流成 90°處的光學系統收集之。光學系統中的阻 斷濾片用于阻擋激發光；二色分光鏡及另一些阻斷濾片則用于選擇熒光波長。熒光檢測器為光電倍增管。 散射光檢測器是光電二極管，用以收集前向散射光。小角度前向散射與細胞大小有關。 

整個儀器用多道脈沖高度分析器處理熒光脈沖信號和光散射信號。測定的結果用單參數直方圖、雙參數散點圖、三維立體圖和輪廓（等高）圖來表示。 

對細胞進行分選的原理是，由超聲振蕩器產生高頻振蕩，使流動室發生振動，把噴嘴噴出的細胞液流斷裂成一連串的均勻小液滴，有的液滴含有細胞。這些細胞在形成液滴前，光學系統已測定了它們的信號（代表細胞的性質），如果測得信號與所選定的要進行分選的細胞性質符合，或者說，如果發現了要進行分選的細胞時則在這個選定細胞剛形成液滴時，儀器給整個液流充以短暫的正或負電荷。當該液滴離開液流后，其中被選定細胞的液滴就帶有電荷，而不被選定的細胞液滴則不帶電。帶有正電或負電的液滴通過高壓偏轉板時發生向陰極或向陽極的偏轉，從而達到了分類收集細胞的目的。 

1、檢測指標： DNA倍體分析、DNA含量分析、細胞周期、細胞凋亡；細胞表面抗原分析：淋巴細胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型、血小板相關抗體分析、PNH相關抗原檢測（CD55/CD59）、胞內細胞因子檢測等。 

2、樣本及來源： 

1) 細胞數量達到檢測所需（細胞周期1x106、細胞凋亡3x106）,生長良好，無污染，附有細胞生長照片， 注明實驗檢測項目所需試劑盒；來源于人、小鼠、大鼠或其它。

2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。

3）試劑：部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供；特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，我公司可以代購；用戶所提供抗體應可與樣本發生特異性識別反應。 

4）樣品包裝要求：細胞培養在培養瓶中或操作前樣本于合適的條件保存。 

檢測說明： 

1、用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預約，同時說明實驗目的、方法等。最低收費300元。 

2、我公司在正式接受實驗委托一周內交付實驗結果。所提供實驗結果忠實于樣本的實際情況。 

3、用戶須一次性全額預付實驗費。 

4、由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。 

5、請在表中說明檢測具體要求，由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責。 

6、請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責保存。 

附：流式細胞術檢測樣品推薦制備方法 

A. 直接標記抗體（FITC標記抗體）： 

(1)收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。 

(2)用4%多.聚.甲.醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離 心5min。 

(3)用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含 0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。 加入200ul 1% 多.聚.甲.醛固定，待測即可。 

(4)用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10,000.00個細胞。 

B. 未標記抗體間接免疫熒光標記法： 

(1)收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。 

(2)用2ml 4%多.聚.甲.醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min；

(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。 (4)加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心 5min，洗去未結合一抗，重復一次。 

(5)加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩 次。

(6)加入0.5ml 1%多.聚.甲.醛重懸細胞；固定待測。

(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10,000.00個細胞。

C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備： 

(1)待測樣本制成單細胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。

(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。 

(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。 

(4)PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。 

收費標準/服務周期/提供結果： 

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