骨染色方法有很多種,例如甲苯胺藍法、阿利新藍法、番紅O法、Goldner三色染色法等。Goldner三色染色又稱戈德納三色 染色,與Masson三色染色類似,三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。 Goldner三色染色液染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關:分子的大小由分子量來體現,小分子量易穿透結 構致密、滲透性低的組織;而大分子量則只能進入結構疏松的、滲透性高的組織。該染液多用于骨類物質的染色,對細胞染 色效果較好,尤其適用于代謝性疾病(Paget病、骨性營養不良等)的研究,以評估成骨細胞和破骨細胞的活性,并容易辨認 骨髓中的轉移性腫瘤細胞。
【自備材料】
1、系列乙醇
2、蒸餾水
【使用方法】
1、切片二甲苯脫蠟或脫塑料,乙醇漂洗,入水。
2、入配制好的Weigert鐵蘇木素染色20~30min。
3、流水沖洗1min,用酸性分化液迅速分化(一般<5s)。
4、流水沖洗5min,蒸餾水稍洗。
5、入Acid Ponceau染色液染色5min。
6、在上述過程中按蒸餾水:弱酸溶液=4:1比例配制弱酸工作液,用弱酸工作液洗15~30s。
7、入Orange G染色液染色,直至Ponceau染色液,一般需要3~10min。
8、用配制好的弱酸工作液沖洗15~30s。
9、直接入亮綠染色液中染色5min。
10、用配制好的弱酸工作液沖洗3次,每次15s。
11、蒸餾水沖洗,吸干或晾干,無水乙醇快速脫水,中性樹膠封固。
【染色結果】
礦化骨 綠色 類骨質 橙色-紅色 軟骨 紫色 細胞核 藍色-灰色
【注意事項】
1、切片脫蠟應盡量干凈。固定起著重要的作用,使用不同的固定液可延或縮短染色時間。
2、取A1、A2等量混合即為Weigert鐵蘇木素染液,一般24h失去染色力。
3、酸性分化時間應根據切片厚薄、組織的類別和新舊而定。
4、弱酸溶液可使色彩更清晰鮮艷,如使用量大可自行配制0.1~1%乙酸溶液予以替代。
5、Orange G染色液染色時在鏡下控制,以麗春紅脫去為準。
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